Small（德国）| 靶向CD47的抗体-寡核苷酸偶联物递送miR-34a用于三阴性乳腺癌免疫治疗

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该研究开发了一种新型抗体-寡核苷酸偶联物（AOC）平台，通过结合抗CD47抗体与miR-34a，实现对三阴性乳腺癌（TNBC）的靶向治疗。利用生物可裂解连接子确保miR-34a在胞内高效释放，有效恢复其抑癌功能，同时调节肿瘤微环境，显著促进巨噬细胞吞噬和CD8+ T细胞激活，且无系统毒性。

 

文献概述
本文《Targeted Delivery of miR-34a via Anti-CD47 Antibody Conjugates for Enhanced Cancer Immunotherapy in Triple Negative Breast Cancer》发表于《Small》杂志，回顾并总结了三阴性乳腺癌（TNBC）的治疗难点及miRNA-34a（miR-34a）在肿瘤免疫调节中的作用。研究团队通过构建抗CD47抗体与miR-34a的偶联物，实现靶向递送，避免传统脂质体递送系统（如MRX34）的缺陷，如内体滞留和系统毒性，从而为TNBC治疗提供新的策略。

背景知识
三阴性乳腺癌（TNBC）是一种缺乏ER、PR和HER2表达的高度侵袭性乳腺癌亚型，因其异质性和受体缺失，靶向治疗受限。miR-34a是一种已知的肿瘤抑制miRNA，通过调控多个促癌基因（如SIRT1、PD-L1）促进肿瘤细胞凋亡并增强免疫应答。然而，裸miR-34a在体内稳定性差，且难以高效进入胞质，导致临床试验失败。CD47作为“别吃我”信号，广泛表达于TNBC细胞表面，与免疫逃逸密切相关。本研究通过抗CD47抗体偶联miR-34a，利用内体逃逸和生物可裂解连接子实现高效胞质递送。该策略不仅克服了传统递送系统的局限性，还通过双重机制（免疫检查点调控和基因沉默）增强抗肿瘤疗效，为TNBC的精准治疗提供了新方向。

 

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研究方法与实验
研究团队开发了一种新型抗体-寡核苷酸偶联物（AOC）平台，通过抗CD47抗体与miR-34a的共价连接，使用生物可裂解连接子（如GSH可裂解的SS键）以实现胞质特异性释放。首先，通过点击化学偶联策略将miR-34a与抗CD47抗体偶联，随后在4T1 TNBC细胞中评估其内吞效率、内体逃逸及功能活性。通过流式细胞术、共聚焦显微镜和qRT-PCR等手段验证miR-34a在靶细胞中的表达及下游基因调控。

关键结论与观点

• 成功构建aCD47-C-miR34a偶联物，并在1:4摩尔比时达到最佳偶联效率，通过完整蛋白质量分析和非还原凝胶电泳验证其结构稳定性。
• 在体外实验中，aCD47-C-miR34a显著提高miR-34a的细胞摄取效率（81.6% vs. 6.74%），且通过CD47介导的内吞作用实现高效胞质释放。
• 在4T1 TNBC模型中，aCD47-C-miR34a通过GSH触发的连接子裂解有效释放miR-34a，显著降低PD-L1和SIRT1表达，诱导细胞凋亡并激活树突状细胞（DC）和CD8+ T细胞。
• 与非裂解型偶联物相比，aCD47-C-miR34a在6小时后显示出更低的内体共定位，且能有效逃逸至胞质，避免溶酶体降解。
• 在体内实验中，aCD47-C-miR34a组的肿瘤组织中miR-34a积累量显著高于对照组，且肿瘤生长抑制率达90%以上，同时无系统毒性。
• 该偶联系统在小鼠模型中有效增强巨噬细胞吞噬和CD8+ T细胞浸润，显著改善抗肿瘤免疫应答。

研究意义与展望
本研究为TNBC的治疗提供了一种安全高效的miRNA递送平台，通过CD47靶向和内体逃逸机制，解决了传统递送系统的稳定性差、内体滞留及系统毒性问题。未来该策略可用于其他免疫逃逸型癌症，如非小细胞肺癌、卵巢癌等，推动精准RNA疗法在肿瘤免疫治疗中的应用。

 

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结语
综上所述，本研究成功开发了一种基于抗CD47抗体的miR-34a递送系统，克服了传统miRNA疗法的瓶颈。aCD47-C-miR34a通过CD47介导的内吞作用高效进入TNBC细胞，并在胞内GSH作用下释放miR-34a，恢复其抑癌功能。该系统在体外和体内均表现出高稳定性、低毒性及强效的抗肿瘤免疫应答。同时，它有效调控PD-L1表达，增强CD8+ T细胞活性，为TNBC治疗提供了一种新型RNA免疫治疗策略。这一平台具有广泛的临床转化潜力，尤其适用于异质性强、免疫逃逸活跃的癌症治疗，为下一代AOC技术在肿瘤靶向治疗中的应用奠定基础。

 

Youngri Ryu, Eun Hye Kim, Hochung Jang, Hong Yeol Yoon, and Yoosoo Yang. Targeted Delivery of miR‐34a via Anti‐CD47 Antibody Conjugates for Enhanced Cancer Immunotherapy in Triple Negative Breast Cancer. Small (Weinheim an Der Bergstrasse, Germany).